Uncategorized
สีหยอดดีเอ็นเอ
สีหยอดดีเอ็นเอ เป็นสีที่ใช้ผสมกับสารละลายดีเอ็นเอก่อนที่จะนำไปศึกษาโดยวิธีอะกาโรสเจลอิเล็กโทรโพรีซีส สีหยอดดีเอ็นเอที่นิยมใช้กันในปัจจุบันมีหลายชนิด ซึ่งแต่ละชนิดมีส่วนประกอบที่แตกต่างกัน(ตามตาราง) อย่างไรก็ตามในการเตรียมสีหยอดดีเอ็นเอไม่ว่าชนิดใดมักเตรียมในรูปที่มีความเข้มข้น 6 เท่า ของความเข้มข้นที่ใช้จริง(6X) ดังนั้นในการใช้งานจึงต้องนำสีหยอดดีเอ็นเอ(ความเข้มข้น 6X) มาผสมกับสารละลายดีเอ็นเอในอัตราส่วน 1:5 เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายของสีหยอดดีเอ็นเอเท่ากับ 1X
สีหยอดดีเอ็นเอมีหน้าที่สำคัญ 2 ประการ คือ
- ทำให้สารละลายดีเอ็นเอหนักกว่า(มีความหนาแน่นมากกว่า)บัฟเฟอร์ ดังนั้นเมื่อนำสารละลายดีเอ็นเอที่ผสมกับสีหยอดดีเอ็นเอแล้วมาหยอดลงในช่องหยอดดีเอ็นเอ จะทำให้สารละลายดีเอ็นเอตกลงสู่ก้นของช่องดังกล่าว
- ทำให้สามารถติดตามการเคลื่อนที่ของดีเอ็นเอผ่านแผ่นอะกาโรสเจลได้ โดยปกติแล้วดีเอ็นเอเป็นสารที่ไม่สามารถมองเห็นได้โดยตรง ดังนั้น ในขณะที่ดีเอ็นเอเคลื่อนที่ผ่านแผ่นอะกาโรสเจล จึงทำให้ไม่สามารถบอกได้ว่าขณะนี้ดีเอ็นเอเคลื่อนที่ไปอยู่ที่ตำแหน่งใดในแผ่นอะกาโรสเจล แต่หากนำสารละลายดีเอ็นเอไปผสมกับสีหยอดดีเอ็นเอก่อนที่จะนำมาศึกษาโดยวิธีอะกาโรสเจลอีเล็กโทรโฟรีซิส สารมีสีที่เป็นส่วสนผสมในสีหยอดดีเอ็นเอจะเป็นตัวบ่งบอกให้ทราบว่าขณะนี้ดีเอ็นเอเคลื่อนที่มาอยู่ตรงตำแหน่งใดในแผ่นอะกาโรสเจล โดยไซลีนไชยานอลเอฟเอฟ(xylene cyanol FF) ซึ่งมีสีฟ้า จะเคลื่อนที่ผ่านแผ่นอะกาโรสเจลในตำแหน่งที่ใกล้เคียงกับดีเอ็นเอที่มีขนาดประมาณ 4,000 bp ส่วนโบรโมฟีนอลบลู(bromophenol blue) ซึ่งมีสีม่วง จะเคลื่อนที่ผ่านแผ่นอะกาโรสเจลในตำแหน่งที่ใกล้เคียงกับดีเอ็นเอที่มีประมาณ 300 bp และออเรนจ์จี(orange G) ซึ่งมือสีส้ม จะเคลื่อนที่ผ่านแผ่นอะกาโรสเจลในตำแหน่งที่ใกล้เคียงกับดีเอ็นเอที่มีขนาดประมาณ 50 bp ดังนั้นหากเห็นสีของไซลีนไซยานอลเอฟเอฟ (สีฟ้า)โบรโมฟีนอลบลู (สีม่วง)และออเรนจ์จี(สีส้ม)อยู่ตรงตำแหน่งใดบนแผ่นอะกาโรสเจจแสดงว่าดีเอ็นเอที่มีขนาดประมาณ 4,000 bp 300 bp และ 50 bp จะอยู่ใกล้เคียงกับบริเวณนั้นของแผ่นอะกาโรสเจลตามลำดับ
ตาราง แสดง ส่วนประกอบของสีหยอดดีเอ็นเอที่นิยมใช้กันในปัจจุบัน
| สีหยอดดีเอ็นเอ | ส่วนประกอบ(สำหรับความเข้มข้น 6x) |
| ชนิดที่ 1 | 0.25% bromophenol blue 0.25% xylene cyanol FF 0.25% orange G 40% sucrose in water |
| ชนิดที่ 2 | 0.25% bromophenol blue 0.25% xylene cyanol FF 15% ficoll in water |
| ชนิดที่ 3 | 0.25% bromophenol blue 0.25% xylene cyanol FF 0.25% glycerol in water |
A fascinating discussion is worth comment. I do think that you ought to publish more about this issue, it may not be a taboo matter but typically folks dont speak about such topics. To the next! Cheers!!