Author Archives: admin

เรียลไทม์พีซีอาร์(Real-times PCR)

เรียลไทม์พีซีอาร์ เป็นวิธีการที่พัฒนามาจากพีซีอาร์พื้นฐาน เพื่อให้สามารถตรวจวัดปริมาณของดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นในแต่ละรอบได้ทันที ดังนั้นจึงมักเรียกพีซีอาร์แบบนี้ว่า quantitative PCR หรือ qPCR                 ข้อดี qPCR  คือ ทำให้สามารถทราบได้ทันทีว่าปฏิกิริยาพีซีอาร์เกิดขึ้นหรือไม่และหากเกิดขึ้นปริมาณดีเอ็นเอที่ได้เป็นเท่าไหร่ โดยไม่จำเป็นต้องรอตรวจสอบหลังจากที่พีซีอาร์เสร็จสิ้นลง อย่างไรก็ตาม [...]

1 Comments

อะกาโรสเจลอีเล็กโทรโฟรีซิส

อะกาโรสเจลอีเล็กโทรโฟรีซิส คือ วิธีมาตรฐานทางด้านพันธุวิศวกรรม มีหลายขั้นตอนที่ต้องศึกษาและวิเคราะห์ ตัวอย่างเช่น การตรวจสอบว่าการสกัดดีเอ็นเอจากเซลล์ของสิ่งมีชีวิตได้ดีเอ็นเอหรือไม่ หรือการตรวจสอบว่าการตัดดีเอ็นเอด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะดีเอ็นเอถูกตัดได้ถูกต้องหรือไม่ เป็นต้น วิธีมาตรฐานที่ได้รับความนิยมสำหรับใช้ศึกษาและวิเคราะห์ดีเอ็นเอ คือ อะกาโรสเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส (agarose gel electrophoresis) ทั้งนี้เนื่องจากวิธีนี้เป็นวิธีที่ง่าย [...]

1 Comments

สีหยอดดีเอ็นเอ

สีหยอดดีเอ็นเอ เป็นสีที่ใช้ผสมกับสารละลายดีเอ็นเอก่อนที่จะนำไปศึกษาโดยวิธีอะกาโรสเจลอิเล็กโทรโพรีซีส สีหยอดดีเอ็นเอที่นิยมใช้กันในปัจจุบันมีหลายชนิด ซึ่งแต่ละชนิดมีส่วนประกอบที่แตกต่างกัน(ตามตาราง) อย่างไรก็ตามในการเตรียมสีหยอดดีเอ็นเอไม่ว่าชนิดใดมักเตรียมในรูปที่มีความเข้มข้น 6 เท่า ของความเข้มข้นที่ใช้จริง(6X) ดังนั้นในการใช้งานจึงต้องนำสีหยอดดีเอ็นเอ(ความเข้มข้น 6X) มาผสมกับสารละลายดีเอ็นเอในอัตราส่วน 1:5 เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายของสีหยอดดีเอ็นเอเท่ากับ 1X                 [...]

1 Comments

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส(PCR)

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส(Polymerase chain reaction) หรือ พีซีอาร์ (PCR) เป็นวิธีการที่ใช้เพิ่มจำนวนดีเอ็นเอในหลอดทดลองโดยอาศัยการทำงานของเอนไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส(DNA polymerase) ดังนั้น จึงงอาจเรียกวิธีนี้ว่า in vitro enzymatic DNA [...]

การสร้าง Recombinant DNA(rDNA)

การสร้าง Recombinant DNA สามารถทำได้หลายวิธี ดังนี้ การสร้าง DNA library  คือการนำ Genomic DNA ของสิ่งมีชีวิตมาตัดด้วยเอ็นไซม์ตัดจำเพาะ แล้วนำมาเชื่อมต่อเข้ากับเวคเตอร์ซึ่งถูกตัดด้วยเอ็นไซม์ตัดจำเพาะชนิดเดียวกัน จากนั้นจึงนำไปถ่ายในเซลล์เจ้าบ้าน เพื่อขยายปริมาณชิ้นดีเอ็นเอ [...]

1 Comments

คอสมิด(Cosmid)

คอสมิด(Cosmid)  เป็นเวคเตอร์ที่เกิดจากการรวมเอาข้อดีของพลาสมิดและ ƛ เข้าด้วยกันโดยตัดตำแหน่ง cos site จาก ƛ เข้ามาเชื่อมต่อกับพลาสมิดทำให้คอสมิดมีข้อดีคือ(1) สามารถเชื่อมต่อดีเอ็นเอเป้าหมายที่มีขนาดใหญ่ประมาณ 35-45 kb (2)สามารถนำดีเอ็ฯเอสายผสมบรรจุในโปรตีนห่อหุ้มของฟาจ(3)นำเข้าสูเซลล์เจ้าบ้านโดยวิธี transduction และ(4) [...]

1 Comments

เวคเตอร์ชนิดฟาจแลมบ์ดา(Lambda phage)

จีโนมของ ฟาจแลมบ์ดา เป็นดีเอ็นเอเกลียวคู่มีขนาดประมาณ 50 kb โดยมีตำแหน่งที่สำคัญ คือ Left arm มีขนาดประมาณ 8-10 kb เป็นบริเวณที่ประกอบด้วยีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้าง phage progeny [...]

1 Comments

การเลือกใช้พาหะ(Vector)และการทำ Gene cloning

พาหะ( vector ) คือ cloning vector ดีเอ็นเอที่ใช้ในการเพิ่มปริมาณชิ้นดีเอ็นเอที่ต้องการให้ได้ปริมาณมากๆ โดยนำชิ้นดีเอ็นเอที่ต้องการดังกล่าวมาเชื่อมต่อเข้าไปกับ DNA cloning vector ได้ดีเอ็นเอสายผสม(Recombinant DNA;rDNA) จากนั้นจึงนำ Rdna [...]

1 Comments

เอนไซม์ตัดจำเพาะ ในการโคลนยีน

ในการโคลนยีนต้องใช้ เอนไซม์ตัดจำเพาะ ในการตัดสายดีเอ็นเอที่ต้องการ จากนั้นนำไปเชื่อมต่อกับพาหะ(vector)แล้วจึงนำพาหะถ่ายเข้าสู่เซลล์ของเจ้าบ้าน(Host cell)ซึ่งเอนไซม์ตัดจำเพาะสามารถแบ่งตามระบบการป้องกันตัวเองของแบคทีเรียจากผู้บุกรุกของดีเอ็นเอแปลกปลอมได้เป็น 3 แบบโดยแบบที่ 2 (Type II) เป็นเอนไซม์ตัดจำเพาะที่นิยมใช้กันมากในการตัดต่อยีน เนื่องจากโมเลกุลไม่ซับซ้อน คือ ประกอบด้วยสายโพลีเปบไทด์เพียง 1 [...]

1 Comments

การเตรียมชิ้นส่วน cDNA

การเตรียมชิ้นส่วน cDNA หรือ complementary DNA คือการเตรียมชิ้นดีเอ็นเอที่ต้องการจาก mRNA  โดยใช้ reverse transcriptase ซึ่งเป็นผลผลิตของยีนที่มีการแสดงออกเฉพาะบางเซลล์หรือบางเนื้อเยื่อในช่วงเวลาหนึ่งๆ เท่านั้น โดย mRNA นั้นจะมีแค่ส่วนของ [...]

1 Comments